Експресията на клетъчни адхезионни молекули кадхеринови комплекси и тяхната роля в диагнозата на автоимунно булозно дерматоза
Makhneva NV 1 Beletskaia LV 2
1 Москва регионални изследвания и клинична Институт за научни изследвания. MF Владимир, София
2 FGI "Федерален изследователски център по трансплантация и изкуствени органи. ак. VI Шумакова "Министерството на здравеопазването на Република България, София
Кадхерините са разнообразна група от калций-зависимо гликозилирани протеини. Аномалия дисфункция или експресиране на тези молекули води до сериозни разрушителни последици. В автоимунно булозен дерматит нарушение открити степен кадхеринов комплекс изразяване до изчезването от нормалното положение и появата нарушена неговата експресия в зоната на базалната мембрана на епидермиса. Откритите промени в експресията и локализация кадхерин, показват, че под действието на етиологични фактори и патогенетична функция се включва някои гени на други гени, т.е. подтискане на активирането на един и други. Получените данни могат да бъдат използвани като допълнителни диагностични маркери за диференциална диагноза на автоимунни булозни дерматози.
Индиректен имунофлуоресцентен метод
автоимунна булозна дерматоза
3. Мишките липсват desmocollin 1 показват епидермална нестабилност придружени от бариерните дефекти и анормален разграничения
ЛИЗАЦИЯ / М. Chidgey, С Brakebusch, Е. Gustafsson, A. Cruchley, С Haill, S. Kirk, A. Mernitt, A. North, С Tselepis, J. Hewitt //
Кадхерините са най-разнообразната група на калций-зависимо гликозилирани протеини. Те участват основно в клетъчно-клетъчни взаимодействия, предоставяща адхезия между две идентични молекули, които се експресират върху повърхността на двете клетки от същия тип [2, 5]. Цитоплазмения домен на тези молекули е важно във връзка с Цитоскелет протеини, допринася за запазване на клетъчната форма [6]. Освен физически контакт, който е разположен между две клетки кадхерини, те допринасят за множество предавателни сигнали чрез цитоскелетна структура, контролиране растежа и диференциацията на клетките [5]. Молекулите на кожата адхезионни осигуряват комплекс организация включваща епитела, дермата, кръвоносните съдове, нервите, жлези. И всички промени, свързани с експресия аномалия или дисфункция на тези молекули могат да доведат до сериозни разрушителните ефекти [2, 3, 9].
Целта на изследването е да се определи количеството на експресия на кадхерин комплекс в автоимунни булозни дерматози и възможност за използване на данните като допълнителен диагностичен маркер за тези заболявания.
Материал и методи
Дейност, извършена въз основа на клиничен преглед и изследване на биопсии на пациенти с автоимунни булозни дерматози.
Изследване на степента на кадхерин комплекс експресия проведено чрез индиректна имунофлуоресценция, използвайки моноклонални антитела (MAbs) миши анти-кадхеринов комплекс, анти-пан кадхерин (Sigma, USA) при 47 биопсии клинично здрава кожа и биопсии на засегнатите области на 45 пациенти, от които 23 пациенти с автоимунно пемфигус (пемфигус вулгарис 11 пациенти, 9 - себореен пемфигус, пемфигус вегетиращ един пациент, един - пемфигус листо-он - praneoplasticheskoy пемфигус), 16 пациенти с булозен пемфигоид, 2 - линейна IgA-зависима булозен дерматоза, 4 - придобита булозна епидермолиза. Като контрола криостатни срези от различни видове тъкани. Филийки кожата на здрави индивиди, пациенти с кардиомиопатия, човешки бъбреци филийки и резени говеждо сърце. В този комплекс експресия на кадхерин се открива в междуклетъчните пространства на базалната и игловидни слоеве на епидермиса (Фигура а), фоликул в стената на дермата артериоли, възлови плочи в кардиомиоцити в клетка-клетка контактни зони на бъбречните тубули и гломерулите.
Под местна анестезия 2,0% разтвор на новокаин извършва кожна биопсия (от клинично засегнати и незасегнати части) с размери 0.5 х 0.5 cm. Парчета тъкан се замразяват при -20 ° С Серийни криостатни срези 4-5 микрометра дебелина се получават по микротом криостат (-20 ° С) и се използват в определен формат (100% ти студен (4 ° С) ацетон в продължение на 10 минути). След това срезовете се промиват с физиологичен разтвор на фосфатен буфер (PBS), рН 7,0-7,4, в рамките на 3-5 минути. Когато се прилага на секции МАЬ препарати се съхраняват в продължение на 18 часа при 4 ° С във влажна камера. След изплакване за 3-5 мин PBS (рН 7,0-7,4) луминисцентни секции бяха третирани серум срещу миши имуноглобулин ((Институт по епидемиология и микробиология, Руската академия на медицински науки N.G.Gamalei ;. IMTEK, София) в 50- 60 мин във влажна камера в термостат при 37,0-37,2 ° с, промива се отново с PBS 3-5 минути и заключи под покривното в 60% неутрален глицерол а. медикаменти изследвани с помощта на флуоресцентен микроскоп Leitz LABORLUX S (Leika) . формулировките се фотографират на филма RF-3 с лещата и X40 очен gomalem X3.
Част резени, използвани в нефиксирана форма за откриване на фиксиран имуноглобулин в междуклетъчните пространства и в зоната на базалната мембрана епидермиса в автоимунно пемфигус и автоимунни булозни дерматози с лезии на дермо-епидермален възел (булозен пемфигоид, линейна IgA-зависима булозен дерматоза, придобити булозна епидермолиза) съответно. Криостатни срези, фиксирани 96 ° етанол, се оцветяват с хематоксилин и еозин за цел морфологичен контрол.
Резултати и обсъждане
В проучването като клинично непокътнати и засегнатата кожа на 23 пациенти с различни форми на пемфигус намерени нарушаване на експресията на кадхерин комплекс. По този начин, във всички 11 случая проучен пемфигус вулгарис, заедно с области на нормална кадхеринов експресия в междуклетъчните пространства, те показа изчезването на тази локализация на маскиране или едновременно експресиране на кадхерин-позитивни материал в роговия слой и / или на повърхността на кожата (Фигура б). В допълнение, в 5 случая допълнително открива peritsitoplazmaticheskaya или перинуклеарно експресия в различни клетъчни елементи базални и игловидни слоеве с едновременно реакционна зона в базалната мембрана на епидермиса. Immunogistohimichskuyu подобна картина се наблюдава в случаите на вегетиращи (1) и паранеопластичен (1) на пемфигус. Ако в случая на вегетиращи пемфигус маркирани само перинуклеарно кадхеринов експресия в различни клетъчни елементи, при паранеопластичен пемфигус - допълнителни места и в областта на базалната мембрана на епидермиса. Освен това, и в двата случая наблюдаваното натрупване на кадхерин-позитивни материал в роговия слой и поглъщането на повърхността на кожата.
Интересното е, че експресията на кадхерин комплекс с пемфигус вулгарис наблюдавани предимно (в 8 случая от 11) в междуклетъчните пространства на базалната и игловидни слоеве на епидермиса. Където интензитет луминисценция в имунохистохимичен реакция е различен от експресирания кадхеринов експресия комплекса до пълна липсата на места започват образуване интраепиI дермален балон. В случай на образованието интраепиI дермален nadbazalnogo балон разкри един парадоксален феномен: увеличение на експресията на кадхерини в слоеве супрабазалниите, които съставляват мехур на гумата.
Във всички девет случая проучен себорейни пемфигус клинично интактни области, както и в лезии на кожата показва ясна представа смущения експресия на кадхерин: те са от различно ниво на експресия в междуклетъчните пространства на базалната и игловидни слоеве до пълно изчезване от натрупването на определен материал в роговия слой и поглъщането му на повърхността на кожата. На мястото на образуване на интраепиI дермален везикули, както в случая на пемфигус вулгарис, маркиран чрез експресия на кадхерин изразен в супрабазалните слоеве на епидермиса, на съставна гумата. В допълнение, в 5 случая от 9 допълнително открива перинуклеарно експресия в различни клетъчни елементи, и в 3 други случаи - в областта на базалната мембрана на епидермиса.
В области, които интраепиI дермален мехурчета наблюдава загуба на междуклетъчните връзки на дълги секции на епидермиса с всички слоеве и формирането на nadbazalnyh (дълбочина) и повърхността (на нивото на зърнестия слой) интраепиI дермален мехурчета. Интересното е, че в същия пациент в същото време може да се наблюдава образуването на мехурчета при различни нива на слоеве на епидермиса. Изразът за усилване кадхерин са открити в цитоплазмата на кератиноцитите на горните слоеве на епидермиса, и в някои случаи (3 случая) двете части в региона на базалната мембрана на епидермиса.
С едновременното изследване на интактни и клинично засегнати области две себорейни пемфигус пациенти показаха идентичен модел Immunomorphological - Комплекс отслабване кадхеринов експресия на повърхността на базалната и игловидни слоеве peritsitoplazmaticheskoy или перинуклеарно експресията в отделни клетки и улавяне на клетка elelementah на специфичен материал към повърхността на кожата. Освен това, в един случай разкрива експресия в мембрана зона епидермален мазе.
В случай на пемфигус листо-горе изчезване на кадхерин адхезионна молекула експресия в широки области на епидермиса, въпреки морфологичен патология на класическата локализация повърхностен интраепиI дермален мехур с виден експресия в него кадхеринов комплекс.
В проучването на цриостатни участъци от кожата на пациенти с булозен пемфигоид във всички 16 случая учи показа нарушена израз на кадхерин комплекс. По този начин, в повечето случаи (14 от 16), заедно с порции съхраняване кадхеринов върху повърхността на клетки на епидермиса разкрити изчезване или маскиране на експресията на адхезионни молекули на тяхната експресия в зоната на базалната мембрана на епидермиса и перинуклеарно областта на индивидуалните клетъчни елементи препълнен kadgerin- положителен материал под възбудена поглъщането слой и повърхността на кожата. Експресия на кадхерин комплекс в областта на базалната мембрана на епидермиса, наблюдавани при 10 случая от 14, и на мястото на образуване на субепидермален мехур също - по своя капак и дъно. Най-изразен експресията наблюдава при подкожно на пикочния мехур гума (на чертежа). В два случая, булозен пемфигоид кадхеринов комплекс експресия не се наблюдава във всяка от епидермални структури.
Експресия на кадхерин комплекс. Лечението с моноклонални антитела
към пан-кадхерин. Индиректен имунофлуоресцентен метод. X400:
а - цриостатни секции практически здрав човек. Експресия на кадхерин комплекс междуклетъчната дезмозома пространства (стрелка) на епидермиса; б - д: цриостатни секции са клинично здрави участъци от кожата на пациенти с автоимунна булозна дерматоза. Много нормална кадхеринов експресия потискане примесени с области (стрелка) експресия на дезмозома в междуклетъчните пространства в автоимунно пемфигус (б); в - булозен пемфигоид. Експресия на кадхерин изразено на капака (стрелка) подкожно мехур; R - линейна IgA-зависима булозен дерматоза. Реакцията в зоната на епидермален основна мембрана (стрелка) с поглъщането на специфичен материал
до повърхността на кожата; и т.н. - придобита булозна епидермолиза. Тежки реакции
на дермална страна (стрелка) подкожно мехур
В двата случая изследвани, линейна IgA-зависима булозен дерматоза маркиран перинуклеарно експресия на адхезионни молекули в някои кератиноцити и мембрана зона на епидермалния мазе с поглъщането кадхерин-позитивни материал върху повърхността на кожата (Фигура G). Подобна е картината се наблюдава чрез имунохистохимични и в 4 случая учи, придобита булозна епидермолиза. В възел експресията на обелване дермо-епидермален на адхезионни молекули намерени както на епидермална и дермален на части. Най-изразен имунохистохимично реакцията е маркиран на дъното на мехур подкожно (Фигура г).
Под влиянието на различни фактори, включително автоантитела, дисоциация интра- и извънклетъчни кадхерин домени. В този случай, извънклетъчния участък кадхерин отделени от повърхността на клетките по време на acantholysis, а остават в цитоплазмения домен на мембраната, поддържане на връзка с цитоскелета, проведена заедно катенин. В имунохистохимични проучвания това цитоплазмен / вътреклетъчен домен на кадхерин е напълно достатъчно за свързването на антителата, които резултати са положителни реакции при атипична локализация.
По този начин, това проучване е възможно не само да се създаде ангажираност кадхерин комплекс имунопаталогичните процес при автоимунни булозни дерматози, но също така да се определят характеристиките на своя израз в тези заболявания. Последното може да се използва като допълнителен диагностичен маркер за диференциална диагноза на автоимунни булозни дерматози, по-специално булозен пемфигоид и придобита булозна епидермолиза. Тази диагноза на автоимунна булозна дерматоза в ранните стадии на болестта дава възможност за адекватна терапия с намален риск от продължаващо задълбочаване на патологичния процес при пациенти, страдащи от автоимунни булозни дерматози.
Suskova VS MD Професор, ръководител. имунодиагностичен лаборатория и имунната FSI "ги FNTSTIO. акад VI Шумакова "Министерството на здравеопазването на Република България, София;
Snarskaya ES MD Професор на Департамента по кожни и венерически болести на Факултета за следдипломно обучение на лекари Гоу VPO "Първо Московския държавен медицински университет. IM Сеченов ", Министерството на Руската федерация за здравето, град София.
Ние Ви донесе списания, издавани от издателство "Академията за естествени науки"
(High импакт фактор RISC, списания теми, обхващащи всички области на науката)
Научно списание | ISSN 1812-7339 | PI №77-63397
Технология бюро за помощ - [email protected]
Изпълнителният секретар на списание Bizenkova MN - [email protected]
съдържание Magazine е достъпно на Creative Commons «Attribution» лиценз ( "Признание") 4.0 World.
Свързани статии